Chromatographie, Sucre, Pipette

[Blackline]

Bonjour à tous, ça faisait longtemps !

Dans le but de préparer une manipulation peu coûteuse, je me suis mis à imaginer la chose suivante : beaucoup de lycéen n'ont vue qu'une fois de leur vie une "vraie" chromatographie sur colonne. et encore cette dernière pouvait se réaliser à l'aveugle avec des composés colorés. Bref les enjeux de la chromatographie sont souvent inconnues avant d'y être confronté, brutalement le jour nécessaire.

Et quand je dis ça... Les différent profils que j'ai pu observer sont variés et cela m'a amené à constater l'inexpérience d'élèves de Master 1 dans l'application de la chromatographie. Du coups j'me suis mis à me souvenir de votre wiki sur l'extraction de la chlorophylle.

Initialement j'ai pensé développer un TP où la quantité de matière "gaspillé" (c'est au profit de l'apprentissage, je ne sais pas si gaspillé serait le bon terme, mais à en croire les budgets des établissements...) serait limités. Quand on manipule des très petites quantités en laboratoire il peut arriver de faire des chromatographie dans une pipette pasteur. A ce moment la quantité de produit utilisé est limité.

Mais j'me suis aussi souvenu du mot "sucre" utilisé dans votre wiki. Et zut, en le relisant, pour parfaire ma théorie, je vois une confusion... Vous parlez ici de remplir une colonne de sable de Fontainebleau, or si je ne me trompe pas, le sable de Fontainebleau c'est le sable fin employé en sortie de colonne et en entrée de colonne ce qui évite de perturbé l'interface de la phase stationnaire. Le doute surgit surtout à la lecture de ces phrases :

- Remplir la colonne de sable de Fontainebleau sur environ 20 cm de hauteur.
- en remplaçant le sable de Fontainebleau par du sucre glace.

Le sable, c'est majoritairement de la silice. Mais de la silice fine ne s'appelle pas du sable. Alors peut-être ai-je mal compris une ou deux subtilités ? Si vous pouviez confirmer (ou infirmer) le propos tenu dans cette page, ça serait perfect mais en plus si vous pouviez m'assurer que des méthodes où l'ont substitue la phase stationnaire avec du sucre glace, existe bel et bien, j'en serais très heureux !

PS : Je sais que les cyclodextrine sont parfois utiliser comme phase stationnaire chirale cheap mais je dois avouer ne pas avoir plus de précision à ce sujet. Donc quant au sucre glace...

Merci pour le temps de lecture accordé à ce message, et merci d'avance pour vos retours.

[darrigan]

Bonjour,

Oui le sable de Fontainebleau est bien de la silice pas très pure, et c'est bien du sable qui est utilisé dans l'expérience.
Non, la silice pure n'est pas assimilable du simple sable (qui peut contenir aussi des impuretés).
(C'est expliqué dans la partie 5.2 Extraction et séparation)

La page La chlorophylle me semble assez claire et donne le choix de la colonne :
4.2.2 Chromatographie sur colonne de sable
4.2.3 Chromatographie sur colonne de sucre

L'étape "Remplir la colonne de sable de Fontainebleau sur environ 20 cm de hauteur" sert simplement mesurer la quantité de sable nécessaire pour la suite des opérations.

Pour la colonne de sucre : "en remplaçant le sable de Fontainebleau par du sucre glace", on fait exactement comme avant, mais on remplace le sable par le sucre...

Peux-tu me dire quelle phrase pose problème ?

Ceci étant, oui tu peux essayer dans une pipette Pasteur. Ça ne sera pas facile d'obtenir quelque chose d'homogène, ni introduire facilement le sucre dans la pipette... mais si tu y arrives, tu auras une petite colonne tout à fait utilisable, et qui, malgré sa faible longueur, devrait te permettre déjà de voir les différentes fractions apparaître (couleurs différentes).
(Tiens, ça me donne l'idée de faire tester ça par mes étudiants de L3 en guise de Projet labo !)

Note : on pourrait aussi bien tester la chromatographie avec de la "terre de diatomée" (Kieselguhr), laquelle devrait être une silice beaucoup plus pure que le sable de Fontainebleau, et avec une très grande surface spécifique, ce qui est bien. (Et ça ne coûte quasiment rien non plus.)

[Blackline]

Oh et bien c'est parfait. J'ai la réponse a mes questions bon par soucis de pérennité je vais quand même détaillé ce que je pensais être un problème :

Le Sable de fontainebleau, ça a toujours été utilisé comme "encadrement" de la phase stationnaire (dans les manips que j'ai vue, mais je commence a croire qu'il y a un amalgame...). C'est a dire qu'à pars de la silice fine ou de l'alumine, je n'ai jamais utilisé de sable pour faire une phase stationnaire. Du coups j'ai cru (a tort) que vous aviez confondu sable et silice sur la page. Ce qui m'a amené a douter de ce que vous substitué par le sucre.

Si j'ai bien compris : quand on fait une colonne au sable de fontainebleau on met du sable grossier comme encadrement quand même du coups ?

Maintenant que tout cela est délié dans mon esprit, je serais très intéressé par la mise en pratique. J'imagine que cela serait très cool de montrer la chromatographie et ces enjeux en faisant un TP articulé autour de cette approche plus "pédagogique". Content que l'idée soit inspirante, en esperant que les étudiants L3 ne se cassent pas trop les dents dessus... Sinon je m'en voudrais :p

[darrigan]

Si j'ai bien compris : quand on fait une colonne au sable de fontainebleau on met du sable grossier comme encadrement quand même du coups ?

Non pas besoin de sable grossier pour encadrer. Et justement, le sable de Fontainebleau c'est l'un des plus purs et fins que l'on puisse trouver, c'est pour cela qu'on peut l'utiliser comme phase stationnaire.
Voir : http://silicespourtous.fr/sable-de-fontainebleau

[Blackline]

Dans les salles de TP du lycée et des établissement supérieur que j'ai fréquenté... le pot à sable grossier,n c'est écrit fontainebleau dessus. C'est pour ça qu'il y a un soucis je pense.

J'avais cherché aussi de mon coté des images et effectivement ça ressemble pas aux sables d'encadrement !